Орлов В. и др. Исследование хромосомных наборов млекопитающих

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение.......................... 3
I
Приготовление хромосомных препаратов . 5
Метод давленых препаратов............... . 5
Метод высушенных препаратов......... 6
Хромосомные препараты из кратковременной культуры клеток 8
Хромосомные препараты из культуры лейкоцитов периферической крови........ 10
Хромосомные препараты из культуры эмбриональпых фибробластов .............. 12
Приготовление препаратов мейотических хромосом .................14
II
Различные способы окраски хромосомных препаратов . 18
Окраска азур-эозином . 18
Окраска орсеином........... 19
Окраска по Фёльгену....... 20
Окраска гематоксилином по Эрлиху .......... 20
Дифференциальная окраска хромосом .. 21
III
Анализ хромосомных препаратов.......... 23
Поиск и фотографирование метафазных пластинок ... 23
Описание формы хромосом и кариотипирование .................. 25
Кариограммный анализ... 28
Анализ мейотических хромосом ............ 32
Литература .................... 34

Орлов В.Н. и др. Исследование хромосомных наборов млекопитающих.  / В.Н. Орлов, Г.А. Чудиновская, Е.П. Крюкова. –М.: Наука, 1976. –36 с.

 В книге (формат pdf) даны современные методы приготовления хромосомных препаратов из разных тканей и культуры клеток млекопитающих. Приводятся различные способы окраски хромосомных препаратов, включая дифференциальную окраску хромосом, и методы их анализа. Даются практические указания по подсчёту хромосом, правила описания кариотипов, составления идиограмм и кариограмм. Руководство рассчитана на зоологов, генетиков, цитологов, а также на студентов-биологов, ветеринаров и зоотехников.

ВВЕДЕНИЕ

В развитии цитогенетики позвоночных ясно прослеживаются несколько периодов, связанных с изменением и совершенствованием методики работы.
Перечень работ по сравнительной кариологии млекопитающих, опубликованных в 30- 40- и 50-е годы, весьма внушителен. В те годы интенсивно работали несколько научных школ в нашей стране и за рубежом, появились монографии, обобщающие накошенные материалы по хромосомам позвоночных. И все-таки методический уровень работ тех лет был весьма низким. Использовали осмиевую фиксацию и хромосомы изучали на парафиновых срезах, либо кусочки ткани фиксировали уксусной кислотой и раздавливали покровным стеклом. Без описания хромосомных наборов млекопитающих, сделанные до середины 50-х годов, с современной точки зрения крайне несовершенны. В лучшем случае удавалось правильно подсчитать диплоидное число и приблизительно определить положение центромеры в нескольких самых крупных хромосомах. Нередко встречались ошибки и в определении числа хромосом. Фактически все описания хромосомных наборов млекопитающих, сделанные в те годы, должны быть выполнены заново.
Существенный методический прогресс в технике приготовления хромосомных препаратов начался лишь в 50-х годах. Обработка клеток в гипотоническом растворе (Makino, Nishimura, 1952), применение в качестве фиксатора спирт-уксусной смеси (Sachs, 1953), предварительная колхицинация (Ford, Hamerton, 1956) и методика высушенных препаратов (Rothfels, Siminovitch, 1958), совершенство методов культуры тканей – все это произвело настоящую революцию в цитогенетике млекопитающих.
Появилась возможность не только правильно определить число хромосом, но и точно указать положение центромеры в каждой даже самой мелкой хромосоме. Методический прогресс обусловил необычайно бурное развитие цитогенетики млекопитающих в 60-х годах. Были исследованы хромосомные наборы примерно одной трети видов млекопитающих (1200), в самостоятельную область исследований выделилась цитогенетика человека. Цитогенетические методы нашли важное применение в систематике, зоогеографии, эволюции и генетике млекопитающих.
В самом начале 70-х годов начался новый (третий) период в
– 4 –
цитогететических исследованиях млекопитающих, связанный с разработкой и широким применением методов дифференциальной окраски хромосом (полосатые хромосомы). Эти методы в огромной степени увеличивают возможности цитогенетики как в разработке ряда чисто цитологических и генетических проблем, так и в эволюционной зоологии.
В настоящее время все исследования по сравнительной кариологии и подавляющая часть исследований по цитогенетике млекопитающих вообще выполняются на метафазных хромосомах. Свежие ткани животных, обладающие высокой митотической активностью (костный мозг, селезёнка, роговица, семенники, эмбриональные ткани и др.), можно непосредственно использовать для получения хромосомных препаратов. Все-таки чаще ткани или взвесь клеток в питательной среде предварительно колхицинируют, так как стадия метафазы весьма коротка и в каждый момент слишком мало клеток проходят эту стадию даже в митотически активных тканях. Алкалоид колхицин или его синтетический аналог – колцемид разрушают веретено деления клеток и тем самым останавливают митотические деления на стадии метафазы. Поэтому через некоторое время в митотически активных тканях накапливается большой процент клеток, находящихся на стадии метафазы.

Виктор Николаевич Орлов,
Галина Александровна Чудиновская,
Елена Петровна Крюкова
Исследование хромосомных наборов млекопитающих
Методическое руководство
Утверждено к печати
Институтом эволюционной морфологии
и экологии животных им. А. Н. Северцова
Редактор издательства Э. А. Фролова
Художественный редактор Н. Н. Власик
Технические редакторы
П. С. Кашина, Л. Я. Золотухина
Корректоры
Н. Г. Васильева, Г. Н. Джиоева
Сдано в набор 25/XI 1975 г.
Подписано к печати 7/IV 1976 г.
Тираж 2650. Цена 13 коп.
Издательство «Наука» 103717 ГСП, Москва, К-62, Подсосенский пер., 21
2-я типография издательства «Наука» 121099, Москва, Г-99, Шубинский пер., 10

.